Acesta este un microscop optic în care mici abateri ale luminii sau schimbări de fază apar în timpul pătrunderii luminii într-o probă necolorată. Aceste schimbări de fază se traduc într-o imagine, ceea ce înseamnă că atunci când lumina trece printr-o probă opaca, schimbarea de fază luminează proba, creând o imagine iluminată (luminoasă) în fundal.
Microscopia cu contrast de fază produce imagini cu contrast ridicat atunci când se lucrează cu specimene transparente, deci acest lucru este valabil mai ales pentru imaginile de culturi microbiene, fragmente de țesut subțire, țesut celular și particule subcelulare.
Principiul din spatele funcționării microscopiei cu contrast de fază este utilizarea metodelor optice pentru a converti specimenul într-o imagine de amplitudine, care este văzută prin ocularele microscopului.
PCM poate fi folosit pentru a vizualiza celulele necolorate (cunoscute și ca obiecte de fază), ceea ce înseamnă că morfologia celulelor este menținută și celulele pot fi observate în starea lor naturală, cu contrast ridicat și claritate eficientă. Acest lucru se datorează faptului că, dacă specimenele sunt colorate și fixate, acestea vor ucide majoritatea celulelor, o caracteristică pe care microscopia cu lumină în câmp luminos nu o poate elimina.
Schimbările care apar în timpul pătrunderii luminii sunt convertite în modificări de amplitudine, provocând contrastul imaginii.
Combinate cu elemente de îmbunătățire a contrastului, cum ar fi fluorescența, acestea permit o mai bună prezentare a imaginilor specimenului.
Piese ale microscopului cu contrast de fază
Instrumentarea unui microscop cu contrast de fază se bazează pe calea luminii de la primirea unei surse de lumină până la vizualizarea imaginii.
Prin urmare, succesiunea sa constă din:
Sursă de lumină (lampă cu arc cu mercur)
lovitură de grup
deschidere
condensator
Condensator inel
mostră
Scop
placa foto
lumina polarizata
inel de fază
Caracteristicile microscopului cu contrast de fază
Modificarea cauzată de lumina împrăștiată (deviată) și lumina nedeviată care ajunge la proba unde este absorbită este produsă la o anumită lungime de undă și produce culoarea. Diferența cauzată de lumina împrăștiată și lumina absorbită se numește modificarea amplitudinii. Aceste modificări de amplitudine sunt sensibile și, prin urmare, nu pot fi vizualizate de echipamente fotografice, cum ar fi microscopia cu contrast de fază și, prin urmare, sunt vizibile pentru ochiul uman.
Condensatorul unui microscop cu contrast de fază are un disc opac numit gogoașă, în timp ce gogoșia transparentă creează un con de lumină care trece prin eșantion. Pe măsură ce lumina se schimbă, o parte din lumina de pe eșantion este îndoită din cauza modificărilor densității optice, formând o imagine pe obiectiv. Lumina nedeviată va lovi inelele de fază de pe placa de fază, în timp ce lumina deviată va rata inelele de fază care trec direct prin placa de fază, formând o imagine.
Microscoapele cu contrast de fază sunt proiectate cu obiective care pot îndeplini o varietate de funcții atunci când sunt utilizate împreună cu tehnici de îmbunătățire a contrastului, cum ar fi fluorescența. Obiectivul este amplasat într-o placă internă de fază, care își schimbă absorbția luminii și schimbarea de fază (adică, nedifractată), creând un spectru larg pentru a contrasta proba și a crea un contrast puternic în fundal.
Aplicații ale microscopiei cu contrast de fază
Determinați morfologia celulelor vii, cum ar fi celulele animale și vegetale
Studiați motilitatea și structura de mișcare a microorganismelor
Detectarea anumitor elemente microbiene, cum ar fi endosporii bacterieni
