Majoritatea componentelor celulare sunt incolore și nu pot fi distinse clar la microscop. Premisa de bază a microscopiei cu fluorescență este colorarea componentelor cu coloranți.
Coloranții fluorescenți, cunoscuți și sub numele de fluorofori sau coloranți fluorescenți, sunt molecule care absorb lumina de excitație cu o anumită lungime de undă (de obicei UV) și emit lumină cu o lungime de undă mai mare după o scurtă întârziere. Întârzierea dintre absorbție și emisie este neglijabilă, de obicei de ordinul nanosecundelor.
Lumina emisă poate fi apoi filtrată din lumina de excitație pentru a dezvălui locația fluoroforului.
Microscopia cu fluorescență folosește o lumină mai intensă pentru a ilumina proba. Această lumină excită materialul fluorescent din probă, care apoi emite lumină la o lungime de undă mai mare.
Imaginea rezultată se bazează pe lungimea de undă de emisie a unei a doua surse de lumină sau a unei substanțe fluorescente, alta decât lumina utilizată inițial pentru a ilumina și a excita proba.
prelucrare
Lumina la lungimea de undă de excitație este focalizată pe eșantion prin lentila obiectivului. Fluorescența emisă de probă este focalizată pe detector prin lentila obiectivului. Deoarece cea mai mare parte a luminii de excitație este transmisă prin eșantion, doar lumina de excitație reflectată ajunge la obiectiv împreună cu lumina emisă.
formă
„Microscopie cu fluorescență” se referă la orice microscop care utilizează fluorescența pentru a genera imagini, fie că este un dispozitiv mai simplu, cum ar fi un microscop cu epifluorescență, sau un design mai complex, cum ar fi un microscop confocal, care utilizează secționarea optică pentru a obține o rezoluție mai bună. Imagine cu fluorescență.
Cele mai multe microscoape cu fluorescență utilizate sunt microscoape cu epifluorescență, unde excitarea fluoroforilor și detectarea fluorescenței sunt realizate prin aceeași cale optică (adică prin lentila obiectivului).
